Главная

    Часто перед исследователями стоит задача получить белки, которые трудно или практически невозможно экспрессировать с помощью обычных лабораторных бактериальных или дрожжевых микроорганизмов. Причиной этому может послужить токсичность экспрессируемых белков, выпадение их в осадок, из-за отсутствия необходимых факторов или множество других причин. Кроме того иногда возникает необходимость получить белок с меченными аминокислотами, или имеющих в своей последовательности модифицированные или непротеиногенные аминокислоты. Идеально решить эту и многие другие задачи могут, так называемые, бесклеточные или in vitro системы экспрессии.
     Сейчас существует множество систем для in vitro экспрессии на основе клеточных экстрактов из Escherichia coli, ретикулоцитов кролика, проростков пшеницы и клеток насекомых, а транскрипция может осуществляться как с классических экспрессионых векторов так и ПЦР амплифицированных (линейных) фрагментов ДНК. Каждый из них имеет свои преимущества и специфику применения. Так например система экспрессии на основе экстрактов E.coli характеризуется максимальной продуктивностью, а на основе ретикулоцитов кролика позволяет реализовать посттрансляционные модификации, такие как, например, ацетилирование, фосфорилирование и другие. Изотопномеченые белки могут применяться в различных биохимических исследованиях методами спектроскопии ядерного магнитного резонанса, инфракрасной и лазерной спектроскопии, а также масс-спектрометрии. А включение в структуру белка непротеиногенных аминокислот нашло широкое применение в белковых лекарственных препаратах. Кроме того синтезированные белки могут быть экспрессированы вместе с аффинными метками (His-Tag, MBP, GST или стрептавидином) для легкой очистки.
     Немецкая компания 5Prime производит широкий спектр продукции для внеклеточной экспрессии белков. Все наборы комплектуются камерами для проведения реакции, оптимизированы для разных условий проведения экспрессии (объем/время/температура реакции, линейная или плазмидная матрица и многие другие параметры).